分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光譜圖再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律：A=εbc，（A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)b為液池厚度，c為溶液濃度）可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
你可以用uv紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定定三種農(nóng)藥的波長(zhǎng)在某溶液中的zui大、zui小吸收波長(zhǎng)。
配制溶液－在光譜檢測(cè)項(xiàng)下進(jìn)行－調(diào)整檢測(cè)光譜范圍及速度--掃描光譜圖--吸光度zui大處對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)為zui大吸收波長(zhǎng)，吸光度zui小處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)為zui小吸收波長(zhǎng)。
1.光源燈;2.濾光片;3.球面反射鏡;4.入射狹縫;5.保護(hù)玻璃;6.平面反射鏡;7.準(zhǔn)直鏡;8.光柵;9.保護(hù)玻璃;10.出射狹縫; 11.聚光鏡;12.試樣室; 13.光門;14.光電管.
分光光度計(jì)工作原理:
由光源燈(1)發(fā)出連續(xù)輻射光線,經(jīng)濾光片(2)和球面反射鏡(3)至單色器的入射狹縫(4)聚焦成像,光束通過入射狹縫(5)經(jīng)平面反射鏡(6)到準(zhǔn)直鏡(7)產(chǎn)生平行光,射至光柵(8)上色散后又以準(zhǔn)直鏡(7)聚焦在出射狹縫(10)上形成一連續(xù)光譜,由出射狹縫選擇射出一定波長(zhǎng)的單色光,經(jīng)聚光鏡(11)聚光后,通過試樣室(12)中的測(cè)試溶液部分吸收后,光經(jīng)光門(13)再照射到光電管(14)上.調(diào)整儀器,使透光度為,再移動(dòng)試樣架拉手,使同一單色光通過測(cè)試溶液后照射到光電管上.如果被測(cè)樣品有光吸收現(xiàn)象,光量減弱放大器處理,將光能的變化程度通過數(shù)字顯示器顯示出來(lái).可根據(jù)需要直接在數(shù)字顯示器上讀取透光度(T),吸光度(A)或濃度(C).
uv紫外可見分光光度計(jì)基本操作:
(1)通電---儀器自檢----預(yù)熱20min;
(2)用鍵設(shè)置測(cè)試方式:透射比(T),吸光度(A),已知標(biāo)樣濃度方式(C)和已知標(biāo)樣濃度斜率(K)方式;
(3)波長(zhǎng)選擇:用波長(zhǎng)調(diào)節(jié)旋鈕設(shè)置所需的單色光波長(zhǎng);
(4)放樣順序:打開樣品室蓋,在1~4號(hào)放置比色皿槽中,依次放入%T校具(黑體),參比液,樣品液1和樣品液2.
(5)校具(黑體)校"0.000":將%T校具(黑體)置入光路,在T方式下按"%T"鍵,此時(shí)儀器自動(dòng)校正后顯示"0.000"
(6)參比液校"100"%T或"0.000"A:將參比液拉入光路中,按"0A/T"鍵調(diào)0A/T,此時(shí)儀器顯示"BLA",表示儀器正在自動(dòng)校正,校正完畢后顯示"100"%T或"0.000"A后,表示校正完畢,可以進(jìn)行樣品測(cè)定.
(7)樣品測(cè)定:將兩樣品液分別拉入光路中,此時(shí)若在"T"方式下則可依次顯示樣品的透射比(透光度)若在"A"方式下,則顯示測(cè)得的樣品吸光度.
uv紫外可見分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)
(1) 預(yù)熱是保證儀器準(zhǔn)確穩(wěn)定的重要步驟。
(2) 比色皿的清潔程度,直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果.因此,特別要將比色皿清洗干凈.先用自來(lái)水將用過的比色皿反復(fù)沖洗,然后用蒸餾水淋洗,倒立于濾紙片上,待干后再收回比色皿盒中.必要時(shí),還要對(duì)比色皿進(jìn)行更精細(xì)的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡,沖洗。
(3) 比色皿與分光光度計(jì)應(yīng)配套使用,否則會(huì)引起較大的實(shí)驗(yàn)誤差. 比色皿不能單個(gè)調(diào)換 1.3 7200型光柵分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)。
(4) 比色皿內(nèi)盛液應(yīng)為其容量的2/3,過少會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,過多易在測(cè)量過程中外溢,污染儀器. 比色皿中試樣裝入量應(yīng)為2/3～3/4之間。
(5) 拿放比色皿時(shí),應(yīng)持其"毛面",杜絕接觸光路通過的"光面".如比色皿外表面有液體,應(yīng)用綢布拭干,以保證光路通過時(shí)不受影響。
(6) 若待測(cè)液濃度過大,應(yīng)選用短光徑的比色皿,一般應(yīng)使吸光度讀數(shù)處于0.1～0.8范圍內(nèi)為宜.由于測(cè)定空白,標(biāo)準(zhǔn)和待測(cè)溶液時(shí)使用同樣光徑的比色皿,故不必考慮因光徑變化而引起的影響。
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